印第安納大學(xué)的生物化學(xué)家發(fā)現的新化合物，在用于影響乙型肝炎病毒共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（covalently closed circular DNA,cccDNA）的生命周期中具有一定的應用潛力，從而為乙肝治愈的研究帶來(lái)新希望。
 

    1 cccDNA與乙肝

    乙型肝炎病毒（HBV）的基因組（rcDNA）進(jìn)入到細胞核后，rcDNA在病毒蛋白和宿主細胞因子的幫助下修復成共價(jià)閉合的松弛環(huán)狀雙鏈DNA（covalently closed circular DNA,cccDNA）。前基因組RNA（pgRNA）出核后，在胞質(zhì)中形成ε pgRNA,并與病毒的聚合酶P蛋白共價(jià)結合，誘發(fā)核衣殼化。與多數其他的病毒DNA的機制不同，HBV cccDNA通過(guò)pgRNA的反轉錄進(jìn)行**，而cccDNA主要以微小染色體的形式存在于肝細胞內，且其半衰期很長(cháng)（33——100天），細胞核內的最長(cháng)壽命可達14年。只要肝細胞中還存在，cccDNA乙肝病毒的**就不會(huì )停止，并與病毒蛋白裝配成新的完整HBV,以芽生的方式再感染健康的肝細胞，而這是導致乙肝復發(fā)的根本原因。因此，盡管每個(gè)肝細胞內只有約5——50個(gè)cccDNA拷貝，但是只要這些cccDNA池穩定，就可以使得病毒的持續感染延續，因而清除肝細胞內的cccDNA是乙肝徹底治愈所必需的。

    目前，乙肝治療用藥（包括核苷類(lèi)似物）的機制主要是通過(guò)抑制DNA多聚酶，降低外周血的DNA載量。然而，這些藥物大多只能在肝細胞的細胞漿中發(fā)揮作用，對于細胞核內的cccDNA作用有限。也就是說(shuō)，外周血中HBV DNA數量的明顯減少并不代表肝細胞內的HBV DNA數量的同步降低，往往“治標不治本”.就目前而言，只有γ干擾素（干擾素分α、β、γ型，其中α-干擾素仍是目前DNA聚合酶抑制劑拉米夫定、阿德福韋、恩替卡韋、替比夫定、替諾福韋外的最主要的慢性乙型肝炎療法，但是由于長(cháng)期反應效果差和較強的副作用而被禁止）能夠進(jìn)入肝細胞核內，抑制cccDNA的**，并縮短cccDNA的半衰期。但是，目前γ干擾素在臨床應用中對于cccDNA的抑制效果尚不明確，而清除肝細胞核里面的cccDNA尚未有藥物能夠實(shí)現，這構成了乙肝治愈研究的瓶頸。

    因而，現有藥物不能有效清除病毒cccDNA,而且一些藥物在停用后存在HBV DNA和轉氨酶水平的反彈，如果長(cháng)期用藥又有可能導致病毒變異和耐藥性的產(chǎn)生，以致至今最多只有3%——5%的乙肝可以治愈。

    2 核心蛋白變構調節劑（CpAMs）的研究

    在印第安納大學(xué)的研究中，生物物理學(xué)的研究者發(fā)現了一些小分子核心蛋白變構調節劑（CpAMs），可以選擇性且有效地降低病毒載量和病毒抗原。核心蛋白（病毒**所需裝配的病毒核心顆粒，Cp）是涉及多個(gè)步驟、HBV生命周期中高度保守的病毒蛋白，CpAMs可改變HBV核心蛋白。

    在此之前，研究得較多的化合物是異芳基—二氫嘧啶（heteroaryldihydropyrimidines HAPs），通過(guò)誤導正常核衣殼（HBV病毒吸附至細胞后，脫去包膜進(jìn)入到肝細胞內，并脫衣殼）的形成，來(lái)抑制病毒**，從而使得核心蛋白水平下降。相對于核苷類(lèi)似物的治療方案，利用HAP來(lái)抑制病毒衣殼蛋白的形成具有更好的穩定性。

    在目前的研究中，德國拜耳公司研究中心的兩種化合物Bay 38-7690和Bay 39-5493研究得較多，其中氚標記Bay 39-5493與HBV核心顆粒的結合后，對人乙肝病毒具有特異性、對應選擇性和可逆性。Bay 38-7690能夠阻止核心顆粒的產(chǎn)生，但不影響核心蛋白水平。

    3 乙肝的基因治療

    為了針對性地抑制，也有不少研究者將目標投向了基因治療和治療性疫苗的研究中。

    其中，在基因治療方面，RNAi研究得較多，不少研究者致力于將該機制變成治療手段，也有不少實(shí)驗室研究成功的報道。但是，這些研究多基于體外的實(shí)驗展開(kāi)，具體應用至臨床時(shí)，投遞到體內靶細胞效率不高的問(wèn)題幾乎是共性的問(wèn)題：合成的SiRNA在肝細胞內的存留時(shí)間短，而用質(zhì)粒表達的RNAi在體內投遞的效率很低（僅能到達少部分肝細胞，這對于清除幾乎所有的肝細胞內的HBV而言未達到預期），而AAV等載體可被宿主體內抗體中和失效，或誘發(fā)可致命的宿主免疫反應，存在引發(fā)腫瘤等風(fēng)險。

    4 激活機體的免疫應答

    目前，人類(lèi)尚無(wú)有效且廣泛使用的方法，能夠打破免疫耐受，激活機體正常的對HBV的免疫應答，從而在保護肝細胞的同時(shí)清除病毒使患者痊愈。

    至今，國內外已經(jīng)開(kāi)展了較多治療性疫苗研究，包括蛋白疫苗、核酸疫苗、T細胞表位肽疫苗等，但大多處于臨床前研究或Ⅰ期、Ⅱ期臨床研究階段。而且，從已獲得的效果來(lái)看，盡管一些研究過(guò)的治療性疫苗能夠誘導機體的免疫反應，但是其在血清學(xué)改變和病毒抑制的效果上仍然不穩定，因此盡管重慶啤酒、白云山、華麗家族和深圳康泰等的研發(fā)都在進(jìn)行，但至今尚無(wú)有效的治療性疫苗上市。實(shí)現清除cccDNA、打破免疫耐受的道路仍然任重道遠。